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关于PCR产物酶切

做双酶切首先要确定两个酶使用的buffer是否相同,可以到酶供应商的网站上查询(NEB,MBI,TAKARA等) NEB的双酶切表 http://img.dxy.cn/upload/2006/08/13/31219184.pdf 。 同步双酶切 同步双酶切是一种省时省力的常用方法。选择能让两种酶同时作...

如果没有其他杂带就可以。单一条带的PCR产物,如果酶切后也只有一条带,就可以用产物回收试剂盒回收。但如果酶切后有杂带或多条带,就只能做胶回收。

不可以。 首先,采用的是质粒模板; 其次,扩增得到的非单一条带,如果不纯化直接酶切,那么得到的将是带有相应酶切位点的几种片段,继续试验的话,菌落PCR鉴定时可能会出现几种不同大小的条带。 第三、PCR产物里面缓冲液并不是合适的酶切缓冲液...

在设计pcr引物时,会将酶切位点设计在引物里面,但是pcr后的片段是双链平末端,需要将设计的酶切位点粘性末端暴露出来,所以需要酶切处理。

不可以。 首先,采用的是质粒模板; 其次,扩增得到的非单一条带,如果不纯化直接酶切,那么得到的将是带有相应酶切位点的几种片段,继续试验的话,菌落PCR鉴定时可能会出现几种不同大小的条带。 第三、PCR产物里面缓冲液并不是合适的酶切缓冲液...

1、回收PCR产物: 在进行PCR扩增时候,给引物两端设计好酶切位点,一般说来,限制酶的 选择非常重要,尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶,如BamHI,HindIII,提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER,以及各酶在公用BUFFER里的效率。...

对PCR产物酶切内切酶的选择 1. 首先确认PCR产物,取一小部分PCR产物跑胶。 2. 如果产物良好,一个特异性很强的条带,则用过柱的方法提纯(就是你平时用的从溶液中纯化DNA的试剂盒就可以)。楼上说的跑胶后再提,早就过时了。效率很低。 3,提纯...

先分析PCR产物序列上有几个你用的内切酶的酶切位点,然后每两个酶切位点之间的长度就是各个片段之间的长度,由于内切酶的酶切效率,酶切位点不一定会被酶切断,所以要考虑的是‘每两个’酶切位点之间的长度,而不仅仅是‘相邻两个’酶切位点之间的长...

酶切完再PCR是为了与目的基因进行对比看PCR过程中序列是否发生了改变,如:缺失,错配等

你是不是要把双酶切后的质粒与载体连接,而无论是PCR还是载体都无法通过电泳判断是否酶切完全,所以不好进行连接呀?对于PCR产物一般会采取这样的策略,将产物首先连接到T载体上,然后再用设计好的双酶切,电泳回收切下的条带,这样就能确保得到。

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