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荧光定量引物设计原则

实时定量的引物设计要求比较高,可以按普通引物设计的方法来做,但是设计时要注意扩增的片段不能太大,最好在250bp-100bp之间。同时要保证这对引物有绝对的特异性,因为要是产生非特异性扩增的话,就不能准确的计量模板量了,这样就失去了实时定...

参照以下real-time PCR引物设计原则: 1.最好位于编码区5’端的300-400bp区域内,可以用DNAman,Alignment 软件看看结果。 2. 产物不能形成二级结构(自由能小于58.61KJ/mol)。 3.引物长度一般在17-25碱基之间,上下游引物不能相差太大。 4.G+C含...

引物长度,20bp;Tm值可以设置在55度(实验的时候可以用60度退火,两条引物的退火温度不要相差大于2度);产物长度,100-150bp(如果没有合适的引物,产物长度可以设置在80-200)。 如需设计引物,可以微信搜索“为青生物”,由专业人员提供免费的...

1、引物长度一般为15-30bp,常用的为18-27bp,但不能大于38bp; 2、引物GC含量一般为40%-60%,以45-55%为宜,上下游引物GC含量和Tm值要保持接近; 3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右,至少要在55-80℃之间,Tm值曲线以选取72度附近为佳。

还是两条蛇。只不过身子对掉一下 呵呵~~~~~

可以事先混合,混合液作为实时荧光用的最好还是现配现用,毕竟这是一个反应比较灵敏的实验。

(转载,仅供参考) a) 针对双标记探针的引物和探针设计的规则 所选序列应该高度特异。应该选择具有最小二级结构的扩增子。这是很重要的,因为二级结构会影响反应效率。在任何实时应用中期望获得100%的扩增反应效率,这意味着每次循环中,体系内...

选取 目标片段长度在80-250bp的引物,在回头BLAST,特异性良好的话就可以了,一般我会多设计几个,选取最好的那个~

你是直接用primer5设计的引物吗?有时候时会遇到你说的问题,你可以在软件设计出来的基础上,手动的把你的引物移动几个碱基,可以减少一些二聚体或错配,而且,软件给出来的这些结果都只是计算值,你实际应用的时候,退火温度都要五六十度了,即...

可以事先混合,混合液作为实时荧光用的最好还是现配现用,毕竟这是一个反应比较灵敏的实验。

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