kbys.net
当前位置:首页 >> 荧光定量引物设计原则 >>

荧光定量引物设计原则

实时定量的引物设计要求比较高,可以按普通引物设计的方法来做,但是设计时要注意扩增的片段不能太大,最好在250bp-100bp之间。同时要保证这对引物有绝对的特异性,因为要是产生非特异性扩增的话,就不能准确的计量模板量了,这样就失去了实时定...

选取 目标片段长度在80-250bp的引物,在回头BLAST,特异性良好的话就可以了,一般我会多设计几个,选取最好的那个~

不管用什么软件都行,只要满足荧光定量引物设计的原则就可以了。一般在100bp左右,为了得到较好的结果,建议不要超过250bp。是否做内参看你的实验要求是什么,绝对定量只做标准曲线就行,测表达量高低时,有内参定量结果更准确更令人信服。

(转载,仅供参考) a) 针对双标记探针的引物和探针设计的规则 所选序列应该高度特异。应该选择具有最小二级结构的扩增子。这是很重要的,因为二级结构会影响反应效率。在任何实时应用中期望获得100%的扩增反应效率,这意味着每次循环中,体系内...

引物 荧光定量PCR 是利用荧光定量PCR 仪(如ABI 7500、stepone、ROChe LightCycler、Bio-Rad CFX96 等)通过实时追踪 PCR 每一步循环的荧光信号 值来达到对起始模板量的定量分析。一次成功的荧光定量 PCR 反应除了需要稳 定的仪器、优质的 Taq ...

按照实验规则设计 ************************************************************** 如果你对这个答案有什么疑问,请追问, 另外如果你觉得我的回答对你有所帮助,请千万别忘记采纳哟! *****************************************************...

荧光定量通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。 背景知识 荧光定量PCR技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,对PCR产物进...

这个都是可以的,无论谁设计,相同的软件相同的参数结果都是一样的

可以用于正式实验的引物必须满足以下条件: a 溶解曲线单峰,窄而尖,否则可能有非特异性扩增;峰的位置横坐标一般在80度以上,这个温度为PCR产物的解链温度,如果在75度附近,可能是引物二聚体,miRNA染料法检测时,溶解曲线的峰的位置可能在75...

1、引物长度一般为15-30bp,常用的为18-27bp 2、引物GC含量一般为40%-60%,以45-55%为宜,上下游引物GC含量和Tm值要保持接近; 3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右,至少要在55-80℃之间,Tm值曲线以选取72度附近为佳,5'到 3’的下降形...

网站首页 | 网站地图
All rights reserved Powered by www.kbys.net
copyright ©right 2010-2021。
内容来自网络,如有侵犯请联系客服。zhit325@qq.com