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荧光定量引物设计原则

实时定量的引物设计要求比较高,可以按普通引物设计的方法来做,但是设计时要注意扩增的片段不能太大,最好在250bp-100bp之间。同时要保证这对引物有绝对的特异性,因为要是产生非特异性扩增的话,就不能准确的计量模板量了,这样就失去了实时定...

实时定量的引物设计要求比较高,可以按普通引物设计的方法来做,但是设计时要注意扩增的片段不能太大,最好在250bp-100bp之间.同时要保证这对引物有绝对的特异性,因为要是产生非特异性扩增的话,就不能准确的计量模板量了,这样就失去了实时定量的意义了

参照以下real-timePCR引物设计原则:1.最好位于编码区5’端的300-400bp区域内,可以用DNAman,Alignment软件看看结果.2.产物不能形成二级结构(自由能小于58.61KJ/mol).3.引物长度一般在17-25碱基之间,上下游引物不能相差太大.4.G+C含量在40%~60%...

选取 目标片段长度在80-250bp的引物,在回头BLAST,特异性良好的话就可以了,一般我会多设计几个,选取最好的那个~

1、引物长度一般为15-30bp,常用的为18-27bp,但不能大于38bp; 2、引物GC含量一般为40%-60%,以45-55%为宜,上下游引物GC含量和Tm值要保持接近; 3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右,至少要在55-80℃之间,Tm值曲线以选取72度附近为佳。

(转载,仅供参考) a) 针对双标记探针的引物和探针设计的规则 所选序列应该高度特异。应该选择具有最小二级结构的扩增子。这是很重要的,因为二级结构会影响反应效率。在任何实时应用中期望获得100%的扩增反应效率,这意味着每次循环中,体系内...

按照实验规则设计 ************************************************************** 如果你对这个答案有什么疑问,请追问, 另外如果你觉得我的回答对你有所帮助,请千万别忘记采纳哟! *****************************************************...

a) 针对双标记探针的引物和探针设计的规则 所选序列应该高度特异。应该选择具有最小二级结构的扩增子。这是很重要的,因为二级结构会影响反应效率。在任何实时应用中期望获得100%的扩增反应效率,这意味着每次循环中,体系内的扩增子都有两倍的...

荧光定量通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。 背景知识 荧光定量PCR技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,对PCR产物进...

引物 荧光定量PCR 是利用荧光定量PCR 仪(如ABI 7500、stepone、ROChe LightCycler、Bio-Rad CFX96 等)通过实时追踪 PCR 每一步循环的荧光信号 值来达到对起始模板量的定量分析。一次成功的荧光定量 PCR 反应除了需要稳 定的仪器、优质的 Taq ...

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